目前剖腹產(chǎn)代乳技術(shù)是建立清潔級(jí)動(dòng)物群體或SPF 動(dòng)物群體的唯一經(jīng)濟(jì)有效的方法,但是剖腹產(chǎn)凈化技術(shù)給遠(yuǎn)交類(lèi)型群體帶來(lái)了/ 瓶頸效應(yīng)0,數(shù)目過(guò)少會(huì)給基因帶來(lái)隨機(jī)的丟失[7] 。封閉群動(dòng)物的凈化不同于近交系動(dòng)物,要求能夠盡可能的保持現(xiàn)有的基因庫(kù),使凈化前后生物學(xué)特性保持一致。因此,選擇待凈化小鼠時(shí)須保證他們來(lái)自不同的父母,且待剖的母鼠不能少于150 只。
實(shí)施子宮摘除術(shù)凈化小鼠實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)注意凈化鼠與代哺乳鼠的產(chǎn)仔時(shí)間。我們凈化的是湖北的封閉群KM 小鼠,而用做代哺乳鼠是來(lái)自北京的SPF級(jí)KM 小鼠。由于不清楚來(lái)自?xún)蓚€(gè)地區(qū)的KM 小鼠是否可以同步產(chǎn)仔,我們采用SPF 級(jí)比普通級(jí)早2d、兩種小鼠同時(shí)配種、SPF 級(jí)比普通級(jí)晚2 d 的方法進(jìn)行研究。從3 批手術(shù)結(jié)果來(lái)看,第三批,代乳鼠比待凈化鼠早2 d 配種,配種50 對(duì),成功32 例,育成小鼠253 只,成活率64% 。效果最好; 第一批即兩種小鼠同時(shí)配種,成功18 例,育成小鼠150 只,成活率36%,效果次之; 第二批SPF 級(jí)比普通級(jí)晚2 d 配種,僅成功7 例,育成小鼠57 只,成活率為14%,效果最差。
我們認(rèn)為: KM 小鼠的配種時(shí)間應(yīng)該是哺乳鼠早于待剖鼠,因?yàn)楫a(chǎn)仔3~ 4 d 內(nèi),母鼠對(duì)仔鼠的識(shí)別能力并不強(qiáng),提早將代哺乳鼠準(zhǔn)備好,待凈化的仔鼠一旦被剖出來(lái)就有母鼠哺乳。第二批的效果不理想,就是因?yàn)楫?dāng)時(shí)普通級(jí)動(dòng)物已到了臨產(chǎn)期,而SPF級(jí)鼠中沒(méi)有現(xiàn)成的代哺乳鼠。另外基于KM 小鼠產(chǎn)仔數(shù)較多,代哺乳鼠應(yīng)該是待凈化鼠的2 倍,即剖得不滿(mǎn)10 只仔鼠可由1 只代哺乳鼠帶養(yǎng),剖得10 只以上的可由2 只代哺乳鼠分別代養(yǎng)。本次我們將一次產(chǎn)10 只以上的仔鼠,只保留10 只,多余的棄去,本身就是一個(gè)損失。
采取子宮摘除術(shù)進(jìn)行生物凈化小鼠時(shí),由于漏診和不可能持續(xù)不斷進(jìn)行手術(shù),會(huì)有一些待凈化的孕鼠自然生產(chǎn)。補(bǔ)救方法是將這些小鼠分批進(jìn)行凈化,對(duì)已生產(chǎn)的母鼠,在它的第2 或3 胎要認(rèn)真觀察避免漏診。
采用本文介紹的方法凈化小鼠,應(yīng)該特別注意無(wú)菌操作。超凈工作臺(tái)的處理應(yīng)在使用前用紫外線(xiàn)燈照射約1 h,每做完1 例手術(shù)后,用消毒液擦固定板,紫外燈照射5~ 10 min; 傳遞窗在使用前開(kāi)燈至少2 h,并在手術(shù)過(guò)程中持續(xù)用紫外燈照射( 第二術(shù)者在取離體子宮時(shí)除外) ; 傳遞窗內(nèi)/ 滅菌渡槽0,在術(shù)前換掉平時(shí)放置的消毒水,換上新鮮用滅菌水配制成37 e 的2%的過(guò)氧乙酸溶液; 手術(shù)結(jié)束后,從手術(shù)區(qū)到繁殖區(qū)用消毒液擦拭、噴霧、拖地,以防污染。
生物凈化
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